❚ 实验前准备

1.将水浴锅预热至37℃2.用75％酒精擦拭超净工作台，并用紫外线照射30min。3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等。

❚ 具体步骤

1.从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞。迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断地摇动约1min。

注意：这步也可以用一次性薄膜手套套住冻存管，绷紧薄膜后再置入37℃水浴锅里不断摇动。

2.吸10mL培养基加入15mL离心管中，并做好标记。

注意：这步也可以在细胞解冻前提前准备好，特别适合新手操作比较慢的情况。

3.将解冻好的细胞，从冻存管中全部吸到刚才准备好的离心管培养基内。

4.1000转速，离心3min，这个步骤主要是为了洗去冻存液，因冻存液中往往含有DMSO，对细胞有一定的毒性作用（但也有遇到过个别同学没有洗掉冻存液的，似乎细胞也长得不错，不过还是建议洗掉）。

注意：离心记得配平，避免损伤细胞。

5.离心过程，准备T25培养瓶，写上细胞名字、日期、代数，以及自己的大名缩写~

6.T25培养瓶里加入5mL左右培养基。

7.离心完毕后，可见细胞全部沉淀到离心管底部。喷洒酒精后在超净台内将上清液倒弃。

8.吸1mL培养基加入离心管中，轻轻吹打、重悬细胞沉淀。

9.将重悬细胞液全部吸入准备好的T25培养瓶内，并用“十字摇匀法”——平置台面，上上下下、左左右右轻轻摇晃培养瓶各2次。

10.将细胞培养瓶转移到培养箱内。

❚ 温馨提示警惕易犯错误

1.水浴锅未预热或者未预热到37℃。

2.水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。

3.离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。

4.一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。

文章出自 细胞实验外包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/