实验步骤
1. 用预冷的PBS洗涤细胞两次；
2. 加入预冷的RIPA裂解缓冲液（107细胞加入1ml）；
3. 用预冷的细胞刮将细胞从培育介质上刮离，并转移到干净的管中。并置于低速摇床，4℃缓慢晃动15min；
4. 4℃，14000g离心15min，当即将上清转移到一个新的离心管中
5. 将Protein A/G-agarose微球用PBS 洗两遍，用PBS配制成50%的protein A/G-agarose工作液；
6. 在样品中以每1ml中加100μl的比例，加入50%的Protein A/G agarose工作液。水平摇床4℃摇动10min（该步骤的目的是去除非特异性结合的蛋白）
7. 4℃，14000g离心15min，将上清转移到一个新的离心管中，去除protein A/G-agraose微球；
8. 利用BCA法或其他方式测定总蛋白的浓度
9. 用PBS将总蛋白稀释到1 μg/μl以降低裂解液中去垢剂的浓度。若是你感觉你的目的蛋白的浓度低了，你能够将总蛋白浓度提高到10 μg/μl（假设浓度够的话）
10. 加入必然体积的一抗，至整体积约为500μl
11. 用摇床缓慢摇动抗原抗体混合物，4℃留宿
注意：若是若是下游用于激酶或磷酸酶的酶活测定，那么最好将11步改成室温孵育2h；
12. 14000g离心5s，搜集沉淀，而且用预冷的洗涤缓冲液（或预冷的PBS）洗涤3遍（每次加入800μl）
13. （用适合体积的上样缓冲液重悬）搜集上清，用于进一步的下游SDS-PAGE，western-blot或质谱分析
注意：该CoIP操作步骤是将抗体先结合到Protein A/G-argarose微球上，然后再与抗原混合。相对其他方式，最终的得率较低，但幸免了抗体共洗脱的问题。若是你希望取得高纯度的目的蛋白，而不考虑非特异性结合的话，你能够将抗体和蛋白样品在加入Protein A/G-argarose微球之前进行混合，如此最后抗体也会和目的蛋白一同被洗脱下来，从而可能会对western blot检测造成干扰。